非人靈（líng）長類動物（NHP）精液樣本采集（jí）有多種目的，包括生殖研究、物種保護、傳染病研（yán）究以（yǐ）及在藥物開發過（guò）程中評估生殖安全性。在生物醫藥研究中最常見的（de）精液采集方法（fǎ）是電刺激和陰莖振動刺激。電刺激是（shì）利用電流（liú）刺激NHP動物產生射精的（de）過程。最常用的電刺激方法是直腸探針電刺激法（fǎ）（RPE）和陰莖電刺激法（PEP）。據（jù）報道，直腸探針電刺激產生（shēng）的樣品精子濃度低於陰（yīn）莖電刺激。因此，它通常被認為不太適合於精液樣本的定量評價，而用於定性分析。陰莖（jīng）電刺激最常用於收集精子進行定量分析，例（lì）如，測定精子數量和/或濃度，因為該方法采集到的（de）精液量（liàng）較大。而對於小型非人靈（líng）長類動物（如鬆鼠猴和狨猴），陰莖振動刺激法（PVS）是比電（diàn）刺激法更優的采精方法，因為它更適（shì）合這些動物的生理特點，同時對動物的福利影響較小。

直腸探針電刺激法（RPE）

描述（shù）：這（zhè）是較早使用的NHP采（cǎi）精方（fāng）法。通過（guò）直接刺激盆腔器官周圍的神經肌肉，導（dǎo）致盆腔器官收縮和放鬆，從而排出內容物。該過程需（xū）要對動物進行輕度麻醉，但不需要（yào）對動物進行訓練。操作者的技術和培訓對程序的成功至關重要（yào）。

操（cāo）作步驟：動物被輕度（dù）麻醉後側（cè）臥或在保定架上俯（fǔ）臥，使用合適大小的（de）探（tàn）針，在插入探針（zhēn）前，電極需輕磨、衝洗和（hé）消毒。陰莖被輕輕（qīng）拉出並清潔（可用無菌生理鹽水），然後在探針上（shàng）塗上一層薄薄的水溶性潤滑凝膠。探針電極需對準前列腺，為（wéi）了確（què）保電（diàn）極與前列腺接觸（chù），可將（jiāng）探頭的另一端抬起，輕輕向下按壓探頭的尖端。通過逐漸（jiàn）增加電壓直到動物出現腿部（bù）伸展等反應，確定動物的電壓設定點。達（dá）到反應點後（hòu），電壓（yā）保持不變一段時間（最多約5秒（miǎo）），然後逐漸降低。這種電壓的逐步增加、保持和降低構成了一個（gè）完（wán）整的刺激周期。通過多次刺激，通常三組刺激可以產生（shēng）射精。在整個刺激過程（chéng）中，陰莖的尖端（duān）需（xū）要保持在預熱的玻璃燒杯或其他收集容器上方。

適用場景：由於這個方法產生的樣本精子濃度較低，因（yīn）此更適合用於定性分析，如檢測精液中精子的存在（zài）以確認性成熟，以及評估精子細胞的形態。

陰莖電刺激法（PEP）

描述：該方法（fǎ）通過刺激陰莖中（zhōng）的傳（chuán）入（rù）神經末梢，隨後將刺激傳遞到與陰莖勃起和射精相關的傳出（chū）神經通路。該方法在動（dòng）物清醒狀態下采集，傳統（tǒng）的保定方式是使用猴杆或者頸圈將動物固定在開放式的（de）猴椅上，但近期（qī）有研究表明使用封閉箱椅（closed box chair）是一種更優化的保定方式，可以訓（xùn）練動物直接從籠子（zǐ）進入封閉（bì）箱椅內，對動物福利、精液質量都有顯著改善。PEP已被（bèi）證明（míng）能夠更好地刺激整個生殖道，並且由於無需麻醉（zuì），減少（shǎo）了（le）尿液汙染和精液樣本稀釋的問題。此外，與直腸探針法相關的逆行射精（精（jīng）液進入膀胱）的風險在陰莖（jīng）電刺激法中被最小化。這種非侵入性技術確實需要對（duì）動物進行訓練，並且需要控製實（shí）驗環境（例如安靜的房間、熟悉動物的工作（zuò）人員）。與直腸（cháng）探針電刺激技術相比，這種方法可能需要更長的時間（jiān）來獲取樣本，但（dàn）通常不會超過幾分鍾。陰莖電刺激法的一個潛在缺點是，有些動物對（duì）陰莖刺激沒有反應，因此無法提供精液樣本。

操作步驟：將陰莖（jīng）輕輕拉出，用潤滑凝膠（jiāo）包裹的除顫器墊包裹陰莖（jīng），將電極連接到（dào）電刺激器設備上。從低電壓開始刺激（根據動物的（de）品種和體格）不超（chāo）過15秒，逐漸增加到預設的最大值。每次刺（cì）激時，觀察動物的生理反應和射（shè）精，整個過程通常不超過3次刺激。不同品種的（de）電壓刺激相（xiàng）差較大，對於食蟹猴而（ér）言，可以從10-30伏特開始，如果（guǒ）需要，可以以 5-10 伏特的增量逐步增加，最高至約50 伏特。在刺激過（guò）程中（zhōng）將收集管（guǎn）放在陰莖尖端以收集射精的精液樣本。

適用場景：該方（fāng）法適用於需要較高精子數（shù）量（liàng）和質量的場景，如體外受精（IVF）或單（dān）精子（zǐ）卵胞漿內注射（ICSI），因為其能（néng）獲得更高的精液量和精子濃度。

陰莖振（zhèn）動刺激法（PVS）

描述：該方（fāng）法利用自然反射，產（chǎn）生正常的射（shè）精反應，從而獲得自然射精（jīng）。使用經過改裝的振動設備，並配（pèi）備收集容器。該方法通常（cháng）將清醒的（de）動物保定在猴椅上，並在黑暗的房間中進行，避（bì）免動物過於激（jī）動。

操作步驟：將陰莖（jīng）輕輕從（cóng）包皮鞘中（zhōng）拉出（chū），將振動玻璃管（guǎn）放在陰莖尖端並保持接觸。根據動物（wù）對刺激的反應逐漸調整振動參數，並在刺激期間提供休息時間。如果在15-20分鍾（zhōng）內未（wèi）達到射精，則停止刺激。

適用（yòng）場景：在小型非人靈長類動物（如鬆鼠猴和狨猴（hóu））中，PVS是首選方法，因為這些動物體型較小，直接放（fàng）置電極進行陰莖刺激較為困難，且直腸探針法在這些小型NHP物種中也不太適用，較小的（de）生殖道和消化道結構可能無法讓直腸探針精（jīng）準放置。

同時，對鬆鼠猴和狨猴（hóu）的研究發現，與（yǔ） RPE 采集（jí）的樣本相比，振動刺激采集的精液樣本中精子和（hé）附屬（shǔ）腺的產生顯著增加。PVS 可產生質量更高的射精，結合了不需要鎮靜或輕度麻醉的優點，幾乎不（bú）引起不適，並產生無汙染（rǎn）的自然射精。

無論采用（yòng）何（hé）種精液采集方法，均應慎重考慮采精動物的選擇。確認精（jīng）子發生（shēng）（通過檢測精液中的精子）是確認 NHP 性成熟的最（zuì）可靠方（fāng）法。在一些 NHP 種屬中，精液采集（jí）時間應考慮季節性。在此類確認之前，可通過（guò）應用常規選擇標準（如年齡、體重和/或睾丸體積）優化（huà）動物的選擇。睾酮由於其脈（mò）衝式/晝夜節律性（xìng）波（bō）動和動物間個體差異較大，並不是可靠（kào）判定性成熟的指標。

性成熟的具體標準還取決於動物的種屬甚（shèn）至地理來源。例如，來自毛裏（lǐ）求斯的食蟹猴（hóu）已（yǐ）被證實從 3-4 歲開始性成熟（精液中的精子），而來自亞洲大陸的食蟹猴需要（yào）額外一年（nián）（> 4 歲）才能達到性成（chéng）熟（shú）。關於食蟹猴和恒河猴的文獻表明，小於4歲和體重小於4kg的動物不太可能性成熟。

精液采集操作的福利考量

在精液采集時，也應關注（zhù）動物福利的問（wèn）題，比（bǐ）如直腸探針電刺激法（RPE）比其他采精（jīng）技術更具侵入性，因為該方（fāng）法需（xū）要將探針插入動物的直腸，直接刺激前列腺和盆腔器官，可能會對動物造（zào）成一定的不適或潛在的生理損傷。因此在進行直腸探（tàn）針電刺激前，應仔細檢查（chá）直腸是否存在異常，如瘢痕、狹窄（zhǎi）或痔瘡（chuāng）。操作者需（xū）要密切監（jiān）控（kòng）動物的反應和身體狀（zhuàng）況，定期檢查是否有出血或組織損傷的（de）跡象。一旦發現異常，應立即停止操作並給予動物恢複（fù）的時（shí）間。同時，提供必要的操作後護理和采精頻率的限（xiàn）製也是確保動物福利的重要措施。

而陰莖電刺激和陰莖震動刺激法雖（suī）然（rán）無創，動物也是無需麻醉在猴椅或者封閉（bì）箱椅中（zhōng）操作，因此操作（zuò）過程中（zhōng）應關注的是對動（dòng）物進行（háng）馴化（huà）和保定適應，減少動物的應激。同時在電刺激時應嚴格控製給予刺激的電流，以及電刺激（jī）的次數。

通過上文描述（shù），可以看（kàn）出選擇合適的動物以及合適的方法才能夠采集到（dào）合適的樣本，同時應關注動物的福利問題，最大程度減（jiǎn）少對動物的不利影響。