非（fēi）人類靈長（zhǎng）類動物腦（nǎo）脊液采集指南

目的

靈長類（lèi）獸醫協會（APV，Association of Primate Veterinarians）意識到在（zài）非人類靈長類（lèi）動物（NHP，Non-human primate）中，腦脊液（yè）（CSF，Cerebro-Spinal Fluid）的采集（jí）可能對於（yú）臨床和（hé）生物醫學研究都是必需的。由於這項技術存在固有風險，實驗動物獸醫應確定腦（nǎo）脊液采集（jí）對臨床（chuáng）評估的必要性和實用性。為了生物醫學研究目的而進行腦（nǎo）脊液采集須在動物護理和使用委員會（IACUC，Institutional Animal Care and Use Committee）或等同的監管機構批（pī）準下進行。以下建議為IACUC、使用非人類靈（líng）長類（lèi）動物模型的研究人員以及獸醫人員提（tí）供基本信息，以供在（zài）製定腦脊液采（cǎi）集相關的政策和標準操作（zuò）程序（SOP，Standard Operating Procedure）時予以考慮。

背景（jǐng）

腦脊液分析是一種強大的工具，可加強對中樞神經係統內發生的各種過程的檢測，例如：出血、炎症、感染、腫瘤和其他臨床情況。此外，對腦脊液中化合物（如激（jī）素、藥物、神（shén）經（jīng）遞質、生物標誌物、代謝產物和病毒）進行係列評估，在基礎研究和轉化研究中同樣非常重要（yào）。中樞神經係統（tǒng）中的腦脊液體積可通過腦脊液的分泌和吸收而維持穩定。

操（cāo）作注意事（shì）項

腦脊液通常通過腦池或腰椎間隙穿刺采集。其中，通過腰（yāo）椎穿刺采集腦脊液的並發症（zhèng）風險相對較低。因為在大多數非人類靈長類動物中，腰椎穿（chuān）刺位點（diǎn）遠離（lí）脊髓的（de）末端。應適當麻醉動物，並使用無菌技術進行操作，包括剃毛等術部準備和無菌材（cái）料的使用。至少需使用無菌手套、注射器和（hé）針頭，還可考慮使用（yòng）無菌（jun1）手術創巾。腦脊液采集通常以側臥位、胸骨臥位或坐位進行，分別通過（guò）頸（jǐng）部或脊柱的屈曲來改善（shàn）對腦池的進入（rù）或擴大椎間隙（Gereschlager，1987；Magden，2015；Wolf，2012）。選擇的針頭尺寸和長度（dù）應適合非（fēi）人（rén）類靈長（zhǎng）類動物的種屬和體型（xíng）（Brady，2000；Cereschlager，1987；Magden，2015；Wolf，2012）。操作時使用的技術、設備和耗（hào）材（cái），以及圍手術期的護理因（yīn）動物種屬、研（yán）究目的和臨床獸醫的偏好而不同。

有些研究方案（àn）可能需隨時間推移而連續采集腦脊液，或需采集未麻醉（zuì）的受（shòu）試對象的腦脊液樣本。對於這些（xiē）方（fāng）案，可通過長期（qī）植入（rù）的腦（nǎo）脊液穿刺導（dǎo）管（guǎn）從清醒狀態的恒河猴身上連續采集腦脊液，而該導管可連接至（zhì）皮下的采集接入口（Gilberto，2003；Gilberto，2022；MacAllister， 2016）。

在編寫（xiě）本文件時，作者盡一（yī）切努（nǔ）力尋找總腦脊液體積的數值、硬腦膜穿刺的次數（shù）限製或建（jiàn）議、采集頻率、安全的抽取體積以及腦脊液（yè）補（bǔ）充速率相關的最新參考（kǎo）文（wén）獻。對於大多數靈長類動物（wù），這方麵的文獻（xiàn）很有限。此外，采（cǎi）集（jí）方法也各不相同，因為從靈長類獸醫協會成員收集的調查結果表明，各機構（gòu）均可成功地使用多種不同的方法采集腦脊液。因此，作者根據現有（yǒu）的最佳證據提供了腦脊液采集的（de）考慮因素和建議。

作為（wéi）參考，先前的研究已確定成年雄性恒河猴（hóu）（8.0-10.6kg）的（de）表觀腦脊液體（tǐ）積為10+/-0.06 mL，腦脊液流速為0.018+/-0.003 mL/min（McCully，2020）。恒河猴的腦脊液形成速率範圍為28.6-44.2 μL/min（Curran，1970；Lux，1975；Martins，1977）。在這（zhè）方麵需要（yào）對非（fēi）人靈長類動物進（jìn）行（háng）進一步的研究，以（yǐ）促進更具指導性建議的製定。

潛在不良反應

雖然在非人類（lèi）靈長類動物中進行腦脊液（yè）采集時報道的並發症很少，但（dàn）解剖變異以及不適當或技術不佳的操作方法可能導（dǎo）致樣本受損或並（bìng）發症，如出血，腦疝，感染，腦幹、脊髓或神經根損傷以及動物的不適。這（zhè）些（xiē）並（bìng）發症雖然罕見（jiàn），但可能會損害動物福利（lì）。

由於存在風險，應由獸醫或經過培訓（xùn）的獸醫（yī）人員采集腦脊液。對（duì）於未成功（gōng）的腦脊液采集嚐試，實踐可能有所不同。常見做法是允許（xǔ）一（yī）個人進行（háng）最多三次未成功的嚐試（shì）。在第三次嚐試失敗後（hòu），應由另一位（wèi）合格的人員接替。如果第二個人在三次嚐試後仍無法采（cǎi）集到腦脊液，則停止嚐試。同時動物將接受適當的鎮（zhèn）痛治療（liáo），並從麻醉中恢複。在嚐試失敗後更換采集部位（例如從腦池到腰椎）通常可成功（gōng）。如果是未進行成像的失敗嚐試，則可使用（yòng）X線透視輔助穿刺針放置（zhì）。除提高成功率外，影（yǐng）像引導還可降（jiàng）低創傷性穿刺的發生（shēng）率。（Eskey，2001）

術後監測應持續進行（háng），直到動物返回其籠內，並能在沒有支撐的情況下保持直（zhí）立（lì）姿勢。對動物的監測應該至少持續24小時或根據IACUC批準的方案進行（háng）。監測應包括（kuò）對基本的生理、行為和運動（dòng）參數的評估。尤其應評估動物是否出現神經功能障礙的跡象，包括但不限於（yú）嗜睡、抑鬱、昏迷和頭部壓迫感等。在人類（lèi）醫學中，腦（nǎo）脊液采集（jí）後出（chū）現（xiàn）的頭痛和由此（cǐ）引起（qǐ）的顱內低壓並不少見。考慮到非人類靈長類動物中的這種潛在後遺症，應在手術時給予鎮痛治療，並延長2-3天，或根據與頭痛或（huò）脊柱疼痛相關行為的術後觀察結果按（àn）需提供鎮痛治療。最有效的鎮痛方案可能（néng）是術前即開始綜合治療。

IACUC注意事項和記錄保存

IACUC應了解腦脊液采集的相關（guān）工作以及所有可能的並發症，並至少每年對其審查。所有相關信息，如藥物劑量、術（shù）前準備、采集的腦脊液體積、采集頻率以及術後短期和長期恢複情況，均應在IACUC方案中進行描述，並在醫療記錄或實驗室日誌中適當地記錄。

腦脊液可能是研究方案中的關鍵資料，但如果采集技術不恰當，可能（néng）會對（duì）動物福（fú）利（lì）產生（shēng）影響。遞交方案時，應提供采集次數和頻率的（de）科學依據。具（jù）體而言，IACUC還應仔細評估涉及腦脊（jǐ）液采集的每個提案，並考慮以下問題：

1.腦脊液采集是否對實現方案中所述的科學目標至（zhì）關重要（yào）？

2.是否有替代方法和侵入性較小的中樞神經係統評價方法（如（rú）成像技術）可供選擇，如果有，是否考慮過？

3.操作人員是（shì）否接受過適當的（de）培訓並具備足夠的技（jì）能（néng）？

4.是否將提（tí）供適當的圍手術期麻醉和鎮痛方案？有關（guān）麻醉和（hé）鎮痛計劃，應谘詢實驗動物獸醫。

5.采集的（de）腦脊液體積是否符合動物的年齡和體型考慮？

6.腦膜穿（chuān）刺的次數和頻率是否適合動物，以及並發症風險是否已降到最低？如果多次采（cǎi）集腦（nǎo）脊液為研究的一部分，應（yīng）明確（què）規定每隻動物的最大采集次數。

7.術（shù）後監測計劃是否適當？

8.是否考慮了所有（yǒu）可能的術後並（bìng）發症，並列出了所有合（hé）理的幹預方法，包括安樂死？

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