骨髓穿刺抽吸技术  

骨髓穿刺抽吸技术的早期发展主要集中在人（rén）类医（yī）学领域，随后逐渐应用于动物研究。最初的技术较为简单，主要用于获（huò）取骨髓样本以进行血液学（xué）和病（bìng）理学分析。随着研究需求的增加，骨髓穿刺抽吸的技术逐渐得到了改进和优化，设备改进方面引入了专用（yòng）的骨（gǔ）髓穿刺针，这（zhè）些穿刺针具备更好的设计可以减少组织损（sǔn）伤和提高样本质（zhì）量，以及（jí）在操作过程中引入严格的无菌技术以减少感染的风险。

骨髓穿（chuān）刺技术不仅在医学研究中（zhōng）得到广泛应用还扩展到多（duō）个领域。药物研发，评估新药对骨髓（suǐ）的（de）影响，尤其是抗癌药（yào）和免疫抑制药物的研究中；毒理学研究中，同样需（xū）要研（yán）究有毒物质对骨髓的影响；此外，基（jī）因治疗，通（tōng）过获取骨髓细胞进行基因组（zǔ）研究和基（jī）因编辑实（shí）验等（děng）都需要进行骨髓穿刺。本文将介绍实（shí）验犬的骨髓穿刺抽吸（xī）技术。

采（cǎi）集部位

对于（yú）犬，骨（gǔ）髓样本（běn）通常从（cóng）股骨转子窝、肱骨（gǔ）近端或髂骨翼采集，其他部位包（bāo）括胸骨、肋骨（gǔ）。如果（guǒ）骨盆（pén）和股骨区域含有丰富的脂肪（fáng）组织，采集则会变得（dé）更具挑战性。下文主要讲述犬肱骨近端骨髓（suǐ）采（cǎi）集的操作程序。

肱骨近端骨髓采集

材料和设备

○ 无菌手套

○ 电动剪毛器和清洁溶液

○ 局部麻醉药（如利多卡因、布比（bǐ）卡因）

○ 含有2.5% - 3%乙二胺四乙酸溶液（EDTA约2 mL）的培养皿

○ 玻璃显微镜载（zǎi）玻（bō）片

○ 显微（wēi）血细胞比容（róng）毛细血管（图A），有毛细血管球

○ 11号手术刀片

○ 无菌纱布

○ 10或12ml注射器

○ 14G至18G带针（zhēn）芯的骨髓针（图B和C）

A：骨髓穿刺所需的材料和设备（bèi）

B：带盖和针芯的穿刺针

C：已移除（chú）盖（gài）和针芯的穿刺针

操作步（bù）骤

1、在进行深度镇静或全身麻醉后，动（dòng）物侧卧位，修剪采集部位的毛发，可以（yǐ）在采集部位皮下注射局部麻（má）醉剂（如利多卡因、布比卡因），采集部位无菌清洗。如图1A。

图1A：动（dòng）物侧卧位（wèi），采集部位的毛发（fā）已剔除。

2、打开并（bìng）佩戴无菌手套。助理辅助将（jiāng）穿刺针（zhēn）、注射器和手术刀片打开并放入无菌区域，或将这（zhè）些物品以无（wú）菌的方式递给术者。使用10或12ml的注射器，在保持无菌的情况下，抽取约1ml的EDTA溶液。如图1B 。

图1B：从培养皿中抽取EDTA溶液

3、将注射器放置在无菌区域内。移（yí）除穿刺针的盖子和针芯，通过顺时针旋转确保针头的防护装置牢固地连接在针头的基部。将含有EDTA的注射器连接到针头的顶（dǐng）部并旋紧。通过将EDTA喷回培养皿来灌注针头，留下约0.5 mL的EDTA在注射器中。灌注时保持在培养皿上方，不要让无菌（jun1）针头的尖端接触培养皿，然后将注射器（qì）从针头上移（yí）除，置于无菌区域内。重新（xīn）装上针芯和（hé）盖子。注：在大型犬中，可以移除针头防护装置，以方便进入髓腔。如图1C。

图1C：用EDTA溶液灌（guàn）注穿刺针

4、触摸并确定肱骨近端外侧的平坦区域，位于大结节的远端（duān）。确定肩胛骨和肱骨之间（jiān）的肩关节，以（yǐ）确保不会误采到该区域。在（zài）平坦区域正上方的皮肤上切开一个小口。如图（tú）1D。

图1D：在肱骨近端外侧的平坦区域切开一个小口

5、牵拉（lā）皮肤（fū），将针头“弹入”切口，确保（bǎo）针头已穿（chuān）透深层皮下组织。重新（xīn）确认肱骨近端外侧的平坦区域，位于大（dà）结节的远端。将针（zhēn）尖直接放在骨头上，垂直于平（píng）面。以顺时针和逆时（shí）针旋转的方式（shì）适度施加压力，直至针头穿透近端骨皮（pí）质。穿透皮质后，减（jiǎn）小角度，使针头朝向肘部，平行于髓腔。继续扭转，直到针完全嵌入骨内。如图1E。

图1E：穿刺针弹入切口（kǒu）

6、移除盖子和针芯，并迅速连接含有EDTA的注射器。抽吸至可见红骨髓（2 ~ 5 mL足够），并（bìng）将内容物排出到培（péi）养皿。如图1F。

图1F：将骨髓吸入装有EDTA的注射器

7、骨髓包含在白色的（de）针状物中，表明穿刺成功。使用毛细管（guǎn）或带有毛细管球或移（yí）液管球的巴斯（sī）德移液管取出并排出这些颗粒，用于血涂（tú）片制（zhì）备。每片至（zhì）少需要1个针（zhēn）状物；然而，建议每张载玻片至少有（yǒu）3 ~ 5个较大的针状物，以进行充分评估。任何剩余的骨髓（suǐ）内容物（wù）都可以收集（jí）到EDTA管（guǎn）中，并与载玻片一起送往实验室。如（rú）图1G。

图1G：使用巴斯（sī）德吸管取出颗粒以制备血涂片

8、在动物恢复后给与镇痛药物，并根据需要继续使用。

潜在的不良反应、缓解措施或治（zhì）疗（liáo）方法

1、采（cǎi）样部位感染，但这种（zhǒng）情况很少见

2、对软组织如（rú）神经、肌肉和关节表面的创（chuàng）伤

3、采（cǎi）样部位出血

4、术后疼痛

缓解措施

○ 密切（qiē）注意（yì）无菌技术

○ 仔细辨别解剖标志，准备骨骼/骨标本以正（zhèng）确找到解剖标志，避（bì）免对（duì）周（zhōu）围组织造成意外创伤

○ 对（duì）采样部位施加直接压力，髓内出血不会引起大的问题，因为血液会（huì）迅速被（bèi）吸收

○ 术后疼痛通常是（shì）短暂的，镇痛药用作镇静/麻醉的预药通常是足够的，但如果需要也可以在术后使（shǐ）用（yòng）

小结

为了提高骨髓穿刺抽吸的成功率和样本质（zhì）量（liàng），必须制定全面的标准操（cāo）作程序（SOP），涵盖动物准备、麻醉管理、穿刺操作及样本（běn）处理等各个环节，并对实验人员进行系统且广泛的培训（xùn）。此外，实验研究人员应持续（xù）优化和改（gǎi）进技术，精细化操作流程，提升效率与（yǔ）准确性，从而为生物（wù）医学研究提供高质量的样本和可靠的数据支持。